Selecionando o Sistema de Imagem Correto em Gel UV para Resultados Claros e Reproduzíveis

Se as bandas estiverem fracas, o fundo estiver alto ou as imagens estiverem mal expostas, mesmo uma execução bem-sucedida da eletroforese pode ser difícil de interpretar. A qualidade da imagem é um fator crítico para a verificação dos resultados, recuperação da amostra, relatórios e para experimentos com resultados reprodutíveis em laboratórios que realizam gels de DNA, RNA ou proteínas.

Um Sistema de Imagem por Gel UV é composto pelos seguintes componentes: iluminação controlada, gabinete à prova de luz, filtros ópticos, câmera sensível e software de análise. Assim, não basta comparar a resolução da câmera ao decidir qual sistema escolher. O comprador precisa levar em conta todo o processo de imagem, desde a excitação de manchas até a exportação dos dados.

Então, o que é um gel UV Imaging Sistema?

Um sistema de imagem em gel UV é projetado para a visualização e documentação de DNA, RNA ou bandas proteicas após eletroforese em gel. Ao combinar iluminação UV, uma câmera de alta sensibilidade, filtros ópticos e software de análise de imagem, o sistema permite que os usuários capturem claramente imagens em gel e analisem a posição da banda, o brilho e o tamanho molecular. É comumente usado em verificação por PCR, eletroforese de ácidos nucleicos, análise de digestão por restrição e experimentos rotineiros de biologia molecular.

Um sistema de imagem fechado permitirá captura, análise, rotulagem, armazenamento e exportação controladas, algo impossível com uma simples caixa de visualização UV. O Sistema de Imagem em Gel (GI-200) da Longlight combina todas essas características em um único sistema de imagem de bancada para a obtenção diária de imagens laboratoriais.

Por que a Iluminação e a Compatibilidade de Tintura Importam são importantes

Uma boa fonte de UV não é necessariamente a melhor para obter uma boa imagem. O comprimento de onda da excitação deve corresponder à coloração selecionada e deve haver um filtro óptico que passe pela fluorescência emitida. Essa desconexão pode resultar em bandas tênues, alto fundo ou falsas diferenças entre as faixas.

UV de 302 nm é comumente usado para muitas colorações convencionais de ácidos nucleicos, enquanto outros comprimentos de onda ou luz azul podem ser preferíveis dependendo do corante e da aplicação a jusante. É importante que os laboratórios confirmem a compatibilidade da coloração e não utilizem um comprimento de onda para cada ensaio. O guia Longlight para escolher um transiluminador UV informa sobre o comprimento de onda, uniformidade da iluminação e área de visualização, além de como eles afetam os resultados.

Avalie a Câmera como um Completo Cadeia de Imagem

Megapixels são usados para indicar dimensões da imagem, mas não são apenas indicadores de desempenho. A capacidade de gravar bandas tênues e fortes na mesma imagem depende da sensibilidade do sensor e da relação sinal-ruído, além da qualidade da lente e escolha dos filtros, faixa dinâmica e uniformidade da iluminação.

Se for realizado teste de PCR rotineiro, a separação clara das bandas pode ser adequada. Para amostras com baixa abundância e comparações semi-quantitativas, é necessário menor ruído e maior faixa dinâmica. Os usuários devem pedir para ver fotos tiradas pelo usuário com seu tipo de gel e coloração, em vez de depender de uma folha de resolução.

Proteção de DNA durante Imagem e Excisão de Gel

Os ácidos nucleicos podem ser danificados pela exposição aos raios UV, especialmente se o gel ainda estiver exposto aos raios UV durante o processo de corte das faixas. Isso pode diminuir a eficiência da clonagem ou impactar aplicações sensíveis a jusante. Portanto, as exposições devem ser minimizadas.

A flexibilidade do laboratório é fornecida por um sistema que oferece dois modos: UV e luz azul. A UV é adequada para colorações conhecidas e para documentação regular, mas a luz azul pode ser preferível quando o DNA é recuperado do gel, desde que seja usada uma coloração de ácido nucleico compatível com luz azul. Para mais detalhes, veja Longlight Guia de imagem em gel de alta resolução e excisão de gel seguro contra UV.

Faça da Segurança UV um requisito de compra

Os olhos e a pele podem ser danificados pela radiação UV direta ou refletida. Um armário de imagem fechado com painéis bloqueadores de UV e travamentos de porta pode reduzir a exposição acidental à radiação UV.

Procedimentos laboratoriais não substituem recursos de segurança. No entanto, equipamentos de proteção individual adequados, treinamentos, sinais de alerta e práticas operacionais documentadas são exigidos dos usuários. Mas um recinto bem projetado facilitará o comportamento correto e reduzirá a exposição durante a imagem de rotina.

Sistema corresponde ao Laboratório Fluxo de trabalho

Os laboratórios devem estabelecer o resultado desejado da imagem resultante antes de fazer uma compra. Talvez o laboratório de ensino precise ver os resultados rapidamente, ou talvez o laboratório regulado ou de pesquisa queira configurações de aquisição repetíveis, registros de usuário, anotações e arquivos pesquisáveis.

Os benefícios do fluxo de trabalho incluem exposição automática, foco automático, detecção de escada, otimização de imagem, nomeação automática de arquivos, transferência de dados e trilhas de auditoria. Considere Imagem em gel de eletroforese multi-fonte de luz para o laboratório multi-ensaio, que também pode reduzir a necessidade de instrumentos separados.

Experimente com o real Amostras!

Uma demonstração deve incluir não apenas um gel "de laboratório", mas também simular condições "normais". Teste bandas fracas e fortes lado a lado, compare as mesmas faixas de amostra em diferentes partes do palco e compare a configuração automática com uma configuração manual validada.

Veja se o sistema detecta bandas tênues sem saturar as bandas fortes. Considere uniformidade de fundo, consistência de foco, precisão de anotação, velocidade de exportação e facilidade de limpeza. Esses testes devem mostrar o desempenho real melhor do que câmeras de ficha técnica.

Padronizar Imaging Pós-instalação

Mesmo o sistema mais competente variará de usuário para usuário se os usuários alterarem as manchas, exposições, filtros e qualquer outro manuseio de arquivos sem documentá-los. Os laboratórios devem desenvolver técnicas de imagem específicas para cada aplicação e salvar configurações validadas, se fornecidas pelo software.

As seguintes verificações de rotina são recomendadas: Superfície de Imagem, Saída de Iluminação, Foco, Filtros, Capacidade de Armazenamento e Intertravamento de Segurança. Também é útil registrar as datas de manutenção, pois isso pode ajudar a diferenciar a deriva do instrumento de alterações de coloração ou preparação da amostra.

Se você já ter Um sistema, quais são os sinais de que é hora de comprar um novo?

A substituição pode ser justificada se faixas tênues forem frequentemente ignoradas, houver iluminação irregular, as configurações de exposição não puderem ser replicadas e/ou arquivos de imagem estiverem faltando metadados para facilitar a revisão. As necessidades contínuas de manutenção e o fato de que plataformas antigas podem não ser tão resistentes a manchas quanto as mais novas também podem somar ao custo total de ter uma plataforma mais antiga.

Experimentos repetidos, tempo do operador, limitações de segurança e necessidades de gerenciamento de dados devem ser usados para tomar a decisão – NÃO apenas a idade do equipamento. Laboratórios que consideram uma atualização podem chame Longlight para discutir suas amostras, colorações, formatos de gel e requisitos de documentação.

Conclusão

A câmera de maior resolução não é necessariamente o melhor Sistema de Imagem em Gel UV. É o sistema que combina a luz com a química das manchas, evita saturação de bandas, protege o usuário e as amostras e deixa registros consistentes.

Os laboratórios podem usar uma demonstração baseada em amostras ou uma revisão de especificações que foca no fluxo de trabalho para escolher uma plataforma que forneça resultados confiáveis entre operadores e experimentos.

Perguntas frequentes

Q1. Qual é o propósito de um Sistema de Imagem em Gel UV?

Ele captura DNA, RNA ou géis proteicos corados após a eletroforese. As imagens criadas são então analisadas, documentadas, comparadas e exportadas.

Q2. Faz sentido usar imagens UV para recuperar o DNA?

Pode ser usado, mas deveria haver um esforço para minimizar a exposição, já que o UV pode danificar o DNA. Para excisões em gel e clonagem subsequente, geralmente é preferível fazer imagens em luz azul usando uma coloração compatível.

Q3. Por que na imagem capturada as faixas de gel são tênues?

Isso pode ser devido à baixa concentração da amostra, descompasso entre mancha e luz, filtro inadequado, exposição inadequada, luzes antigas ou alta luz de fundo. Todo o conjunto óptico deve ser verificado antes de repetir o experimento.

Q4. Quanto mais megapixels uma câmera tem, melhor fica a imagem, certo?

De forma alguma, há vários outros fatores como sensibilidade, ruído, faixa dinâmica, qualidade das lentes/filtros usados e uniformidade da iluminação. Confira fotos reais em vez de megapixels.

Q5. Qual é a frequência recomendada para verificações de imagem de um sistema de imagem?

As verificações de rotina devem incluir limpeza da superfície de imagem, uniformidade da iluminação, foco, filtros, bloqueios de segurança e consistência da imagem.