Serviço de Microscopia Crio-Elétrona
A microscopia eletrônica criogênica (crio-EM) é uma técnica de ponta em biologia estrutural que permite aos cientistas visualizar os detalhes precisos das macromoléculas biológicas. Crio-EM é baseado em microscopia eletrônica de transmissão em resolução próxima da atômica. Crescente demanda de mercado em diversas aplicações biomédicas, por exemplo, desenvolvimento de medicamentos, anticorpos, vacinas e assim por diante.
Vantagens da crio-EM em relação à cristalografia de raios X
Apesar da difração de raios X ainda conseguir alcançar uma resolução ligeiramente maior, a crio-EM apresenta vantagens significativas:
- É necessária uma quantidade mínima de amostra.
- Não há necessidade de cristalização.
- Não precisa de uma fonte de raio-X sincrotron.
- Preservação de um estado quase nativo.
- Avaliação da flexibilidade.
- Adequado para partículas de difícil cristalização, como proteínas de membrana ou conjuntos supramoleculares (por exemplo, vírus).
- A heterogeneidade das conformações pode ser resolvida em um único estémeme.
- Baixo nível de pureza aceito.
Crescimento exponencial do número de entradas no EMDB:
Soluções Estruturais
- Avaliação de Adequação Amostral – Mancha Negativa
Antes de investir recursos importantes no microscópio crio-EM, o exame de coloração negativa geralmente é realizado em temperatura ambiente e baixa voltagem. Essa etapa permite a avaliação da adequação da amostra, incluindo homogeneidade, agregação, morfologia das partículas, tamanho e distribuição, usando um agente de coloração de alta densidade eletrônica.
A coloração negativa serve como uma etapa crítica de controle de qualidade para avaliar se uma amostra é adequada para aquisição de dados crio-EM a jusante.
- Determinação de Estrutura em Alta Resolução – Análise de Partícula Única (SPA)
A aquisição de dados crio-EM normalmente gera aproximadamente 10⁴ a 10⁶ projeções individuais bidimensionais de partículas capturadas em várias orientações. Essas projeções são computacionalmente alinhadas e classificadas por meio de um fluxo de trabalho de processamento de imagem para reconstruir um mapa de densidade tridimensional em resolução subnanométrica ou quase atômica.
Um modelo atômico é posteriormente construído, refinado e validado dentro do mapa de densidade reconstruído, fornecendo insights estruturais sobre os mecanismos funcionais da macromolécula biológica de interesse.
- Análise Estrutural In Situ – Tomografia Crio-Eletrônica (Crio-ET)
A criotomografia eletrônica permite a visualização tridimensional de estruturas biológicas em seu contexto celular ou viral nativo. Essa abordagem é particularmente adequada para estudar grandes conjuntos macromoleculares, complexos associados a membranas e mecanismos de infecção viral, oferecendo informações espaciais e organizacionais inacessíveis por métodos de partícula única.
Fluxo de Trabalho de Serviço
Consulta de projetos → assinatura de → acordo de serviço, confirmação → amostra, recebimento → inspeção de qualidade → triagem negativa de manchas → coleta de dados crio-EM, → processamento de dados → entrega de relatórios.
Dados e Entregas de Resultados
A disponibilidade completa dos dados é fornecida ao longo de todo o ciclo de vida do projeto. Os materiais entregues incluem filmes cryo-EM brutos com arquivos de referência de ganho, arquivos de dados intermediários em vários estágios do processamento de dados, mapas finais de densidade tridimensional com métricas de resolução e qualidade, modelos de coordenadas atômicas quando aplicável e relatórios de validação cruzada, como avaliações MolProbity.
Todos os dados podem ser entregues por meio de dispositivos de armazenamento portáteis ou plataformas seguras baseadas em nuvem.
Três Equipamentos Principais
Nossos serviços crio-EM são apoiados pelo acesso a plataformas de pesquisa científica de alto nível equipadas com instrumentação de última geração.
Sistemas disponíveis incluem Talos L120C G2, uma plataforma de microscopia eletrônica de transmissão e crio-eletro de nível básico; Glaciares 2, um sistema crio-EM de 200 kV otimizado para fluxos rotineiros de partícula única e tomografia; e Titan Krios G4, uma plataforma crio-EM de 300 kV de topo de linha projetada para máxima estabilidade, automação, throughput e potencial de resolução.
Essas plataformas suportam coletivamente triagem criogênica, análise de partícula única, criotomografia eletrônica e desenvolvimento de métodos avançados em uma ampla gama de aplicações em biologia estrutural.
Por que Longlight?
Oferecemos experiência valiosa e madura em criomicroscopia eletrônica por meio do acesso a plataformas de pesquisa científica de alto nível e colaboração com especialistas da indústria e assessores científicos acadêmicos. Nossos serviços enfatizam total transparência e completude na entrega dos dados, abrangendo dados brutos, arquivos intermediários de processamento, mapas finais de densidade, modelos atômicos e relatórios de validação.
Ao combinar instrumentação avançada, fluxos de trabalho experientes em processamento de dados e prazos de entrega equilibrados, fornecemos soluções estruturais crio-EM confiáveis e de alta qualidade, adaptadas para diversas necessidades de pesquisa.
Perguntas Frequentes.
P1: Quanta amostra os clientes precisam preparar?
- Mancha negativa:
concentração mínima ~1 g/L
volume mínimo ~100 μL.
- SPA com proteínas solúveis:
concentração mínima ~1 g/L
volume mínimo ~100μL.
- SPA com proteínas de membrana:
concentração mínima ~1 g/L
volume mínimo ~100μL.
a ser discutido e ajustado, se necessário
P2: Quais são os requisitos para o buffer de amostras?
- Faixa de pH: 6,0-8,5
- concentração de sal <200 mM
- Baixo glicerol (quanto? DOI: 10.1107/S2053230X24002553)
- Azida baixa (quanto? Referência de apoio está faltando)
P3: Qual é um processo típico de serviço?
Consulta do projeto → assinatura → acordo de serviço, confirmação → amostra, recebimento → inspeção de qualidade → manchação negativa → coleta de dados→, processamento → entrega de relatórios.
P4: Qual é o tempo médio de entrega?
- Coloração negativa: 1-2 semanas.
- SPA, resultados preliminares: 6-8 semanas.
- SPA, modelo de alta resolução: 2-3 meses.
ChIP-seq
O ChIP estuda a interação entre DNA e proteínas, e o ChIP-seq é combinado com o sequenciamento de última geração para detectar locais de DNA no genoma que se ligam a fatores de transcrição / histonas específicos, que são usados para estudar a interação entre proteínas e cromatina.
Genômica
A Longlight se concentrou no diagnóstico molecular e na biologia molecular, lançamos alguns instrumentos relacionados ao NGS e consumíveis de reagentes, principalmente o Ultrasonicator focado, comprometidos em promover o desenvolvimento da genômica, para melhor atender à causa médica humana.
Consumíveis e kits
A Longlight fornece diferentes tipos de gel de agarose pré-moldado, sequestrante de ácido nucleico, tubo Qubit, kits de extração de ácido nucleico e kits de preparação de biblioteca. Enquanto isso, todos esses produtos podem ser amplamente utilizados em pesquisas científicas básicas, biofármacos e outros cenários de aplicação.
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