Por que o controle de qualidade do produto CAR-T deve usar um catador de ácidos nucleicos

Uma Salvaguarda Crítica na Fabricação Avançada de Terapias Celulares

Um dos principais avanços nos tratamentos contra o câncer foi a introdução da terapia com Receptor de Antígeno Quimérico (CAR-T). Como outros "medicamentos vivos", a qualidade e a segurança dos produtos CAR-T exigem testes rigorosos. No entanto, das muitas ameaças às quais as instalações de produção do CAR-T são vulneráveis, algumas passam despercebidas, e uma das mais críticas é a contaminação ambiental por ácidos nucleicos. Este artigo discute a razão por trás da necessidade do Nucleic Acid Scavenger para o Controle de Qualidade do Produto CAR-T.

[Identificação e análise da agregação de microplásticos em células CAR-T - ScienceDirect]

A Ameaça Não Vista: Contaminantes Ambientais na Fabricação da CAR-T

A produção de células CAR-T é um processo complexo de múltiplas etapas, incluindo a coleta de sangue do paciente, isolamento das células T do paciente, transdução viral para as células T do paciente, expansão das células T do paciente e a formulação final das células T. Durante cada etapa, que pode levar várias semanas para ser concluída, o produto célula CAR-T fica totalmente vulnerável a contaminantes ambientais.

Embora existam alguns requisitos regulatórios, eles focam principalmente em alguns dos outros contaminantes biológicos:

• A FDA exige o teste de produtos de células CAR-T quanto à esterilidade, endotoxinas e micoplasma.

• O Número de Cópia Vetorial (VCN) deve ser controlado em no máximo de 1 a 5 cópias por célula.

• Os requisitos de pureza especificam uma certa porcentagem de células CD3 que expressam CAR.

Comparado a esses outros requisitos de teste, a contaminação ambiental de DNA e RNA recebe maior atenção. Revelar substâncias ambientais nocivas como RNA e DNA deteriora a segurança e a qualidade do produto.

Estudo Recente: Microplásticos em Produtos CAR-T (2024)

Um estudo publicado no Journal of Hazardous Material, de Mahati S et al., discute que terapias baseadas em células CAR-T contêm quantidades problemáticas de microplásticos.

Esse estudo também leva a outras coisas, como:

1. Até agora, microplásticos não foram discutidos em relação à fabricação de células CAR-T.

2. Microplásticos causaram praticamente nenhuma atividade das células CAR-T conforme citometria de fluxo, ELISA e estudos de citotoxicidade.

3. Microplásticos causaram apoptose, ferroptose e exaustão das células T.

4. A via de sinalização do mTOR foi hiperativada.

A pesquisa delineou as seguintes consequências clínicas:

1. As células CAR-T expostas a microplásticos são menos capazes de identificar e destruir células cancerígenas.

2. A exaustão das células T causada pelos microplásticos reduz a resistência subjacente das células CAR-T nos pacientes.

Esse nível de contaminação por microplásticos pode potencialmente tornar o tratamento ineficaz.

Essa linha de pesquisa focou no impacto dos microplásticos, e na descoberta de contaminação de microplásticos e ácidos nucleicos ambientais na manufatura, que são inseparáveis e estão alojados no mesmo ambiente separado de manufatura e consumíveis.

Marco Regulatório Internacional: Normas GMP para Contaminação

O PIC/S e reguladores mundiais impuseram expectativas claras quanto à contaminação na fabricação do CAR-T.

É isso que a análise de 2026 cita na literatura sobre gestão de qualidade:

• Produtos CAR-T não podem ser esterilizados de forma terminal ou por filtro. Portanto, a prevenção da contaminação é a única linha de defesa restante.

• Uma estratégia de Controle de Contaminação (CCS) deve incluir pessoal, equipamentos/componentes, ambiente da instalação, materiais, processo e detecção/prevenção.

• No controle de contaminação por ácidos nucleicos, considerações especiais incluem:

• A capacidade dos programas de monitoramento ambiental para detectar resíduos de ácidos nucleicos.

• Áreas de produção dedicadas para evitar a contaminação cruzada de diferentes produtos para pacientes.

• Os procedimentos de limpeza devem ser validados para demonstrar a remoção da contaminação por DNA/RNA.

• A Lacuna Regulatória: As regulamentações atuais indicam "desinfecção" e "validação de limpeza", mas há pouca ou nenhuma exigência para demonstrar a remoção de ácidos nucleicos. Consequentemente, os fabricantes ainda correm risco de contaminação cruzada e de detecção de falsos positivos de ácidos nucleicos.

Contaminação por Ácidos Nucleicos Ambiental Impacta o Controle de Qualidade do CAR-T

DNA ambiental e fragmentos de RNA criam dois grandes problemas:

1. Resultados incorretos em testes de controle de qualidade

DNA plasmídico ou vetores virais podem permanecer na superfície e contaminar amostras de controle de qualidade. Como os ácidos nucleicos ambientais e os ácidos nucleicos do produto não podem ser distinguidos nos testes de controle de qualidade, qPCR e NGS sinalizam preocupações de segurança, levando à rejeição desnecessária de lotes de produtos e atrasos no tratamento para pacientes.

2. Contaminação cruzada entre produtos

Os ácidos nucleicos do produto CAR-T de um paciente podem permanecer nas superfícies dos equipamentos usados para a produção de CAR-T e ser transferidos para o produto CAR-T de outro paciente. Considerando que esse é um risco para uma terapia autóloga, é inaceitável.

3. O Controle de Qualidade do Teste de Potência é Impactado

O teste de potência dos produtos CAR-T requer a medição do nível de expressão de CAR e da atividade funcional das células CAR-T. Os ácidos nucleicos presentes no ambiente podem interferir em ensaios de potência que medem a atividade funcional das células CAR-T por meio do processo de transfecção. Isso leva a uma avaliação imprecisa da potência do produto, que pode ser menor ou superior ao nível real.

Introdução ao Nucleic Acid Scavenger

Agentes de limpeza tradicionalmente usados, como etanol ou água sanitária diluída, não destroem os ácidos nucleicos. A degradação química de DNA e RNA realizada pela tecnologia Nucleic Acid Scavenger preenche essa lacuna.

1. Mecanismo de Ação

• Decompõe >99% do RNA/DNA preso à superfície por meio de hidrólise química rápida

• Os componentes não interagem com membranas de sílica ou esferas magnéticas usadas na extração de ácidos nucleicos

• Não afetará negativamente a eficiência da extração ou a qualidade dos ácidos nucleicos isolados

• Valida a autenticidade e confiabilidade dos resultados da detecção subsequente de ácidos nucleicos virais

2. Benefícios para a fabricação do CAR-T

• Versátil: Pode ser aplicado em bancadas experimentais, armários de biossegurança, plástico, espuma e até embalagens em caixas e cartões

• Conveniente: Não precisa alterar a concentração, aplicar uma camada uniforme na superfície com spray

• Seguro: Sem medidas especiais de proteção, luvas padrão, máscara e óculos de proteção são adequados

• Simples: Não são necessárias medidas especiais de controle de armazenamento e manuseio

Longlight Technology - Seu parceiro confiável na fabricação de terapias celulares

A Longlight Technology é um fornecedor confiável de soluções de biotecnologia e laboratório, fundada em 2015 por uma equipe de professores universitários e profissionais técnicos com ampla experiência nos mercados biotecnológicos.

Expertise da empresa:

• Primeiro a lançar o sistema de amostragem por ultrassonagem focada da China e o primeiro sistema de desgaseificação a vácuo fluido do mundo

• Foco em diagnóstico molecular e biologia molecular desde nossa fundação

• Equipamento de laboratório biológico de pesquisa e design de classe mundial

Portfólio relevante de produtos de qualidade da CAR-T:

• Nucleic Acid Scavenger (500mL, 1L, 2L e 5L disponíveis)

• Géis pré-moldados de agarose, tubos de Qubit, extração de ácidos nucleicos e kits de preparação de bibliotecas

• Separadores magnéticos de purificação de ácidos nucleicos, design de campo uniforme

Qualidade e confiabilidade:

• Estabilidade de 1 ano em armazenamento à temperatura ambiente

• Validado para uso em bancadas de trabalho, filmes plásticos, caixas e caixas de espuma

• Para uso apenas para pesquisa e experimentos. Não para diagnóstico clínico

• Presença global: Longlight participou do Medlab Asia & Asia Health 2024 em Bangkok, Tailândia, para servir à comunidade biomédica global.

Integração de Escafadores de Ácidos Nucleicos na Fabricação de CAR-T

O que esperar nos locais de produção do CAR-T:

1. Descontaminação diária:

• Todas as superfícies nos gabinetes de biossegurança antes e depois de cada operação

• Superfícies de equipamentos (centrífuga, incubadoras, separadores magnéticos, etc)

• Transporte de contêineres para produtos intermediários e finais

2.In caso de múltiplas operações, a descontaminação é necessária para:

• Manuseio de superfícies para equipamentos que contatam diferentes produtos de pacientes

• Superfícies de equipamentos de armazenamento (geladeiras, freezers, contêineres de transporte, etc.)

3. Laboratório de controle de qualidade:

• Superfícies onde é feita a preparação para PCR e sequenciamento

• Descontaminação na área de trabalho de extração de ácidos nucleicos

4. Validação:

• Antes e depois de aplicar o Scavenger de Ácidos Nucleicos, realize swabs de superfície

• >99% da remoção de ácido nucleico deve ser confirmada por qPCR

• Os resultados devem estar prontos para as próximas inspeções

Conclusão: Fundamento da Produção de Terapia Celular Moderna

O rápido desenvolvimento das terapias CAR-T resultou em 12 terapias aprovadas globalmente até 2024. À medida que as terapias baseadas no paciente evoluem para terapias prontas a usar, as preocupações com contaminação se tornarão mais evidentes.

Isso será mais justificável devido a:

• Os ácidos nucleicos no ambiente representam uma ameaça à segurança e qualidade do produto final

• Órgãos reguladores estão aumentando os padrões para controle de contaminação

• O estudo de 2024 de Mahati et al. sobre microplásticos destaca como contaminantes ambientais comprometem a função do CAR-T

• Nucleic Acid Scavenger oferece uma solução validada e fácil de usar para esse risco específico

Para os fabricantes de CAR-T, a implementação do Nucleic Acid Scavenger em estratégias de controle de contaminação representa um investimento proativo na qualidade do produto, conformidade regulatória e, em última instância, nos resultados para o paciente. À medida que a indústria avança para terapias celulares genéticas mais complexas, o princípio fundamental permanece inalterado: um ambiente de fabricação limpo produz terapias seguras e eficazes.

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Perguntas frequentes

P1. O Nucleic Acid Scavenger é seguro para superfícies de vidro de armários de biossegurança?

Com certeza. É seguro para vidro, aço inoxidável, plástico e superfícies revestidas. Apenas uma leve borrifada e deixe secar ao ar.

P2. Qual efeito o resíduo terá na viabilidade das células CAR-T?

Literalmente não há impacto algum. O reagente não é citotóxico e não inibe o crescimento da cultura celular.

P3. Então, isso elimina a necessidade de eliminar etanol e água sanitária das nossas práticas diárias?

Não. Deve ser usado apenas para a remoção de ácidos nucleicos e não no lugar de desinfetantes para bactérias e vírus.

P4. Com que frequência devo usá-lo em uma instalação CAR-T GMP?

Antes e depois de cada lote em áreas de trabalho, além de estacionamentos de pacientes em equipamentos compartilhados.

P5. Preciso limpar depois de borrifar?

Não é obrigatório. Deixar a solução secar ao ar maximiza a degradação. A limpeza pode espalhar ácidos nucleicos não degradados.