Como reduzir o tempo de eletroforese de ácido nucleico para 10 minutos?

A eletroforese de ácido nucleico costuma ser mais lenta do que o necessário – roubando tempo, superaquecendo géis e atrasando decisões em laboratórios movimentados.

A dor: por que os géis demoram muito

A maioria das equipes aceita corridas de 30 a 60 minutos como "normais". Mas as corridas longas escondem custos reais. O calor se acumula, as bandas ficam borradas e você perde tempo entre a PCR e a próxima etapa. Os buffers TAE/TBE clássicos não foram projetados para velocidade em intensidades de campo mais altas. Empurre a voltagem e o gel aquece; Empurre por mais tempo e você corre o risco de migração distorcida ou recuperação ruim. Executar novamente um gel para corrigir manchas custa mais do que minutos – isso reduz a confiança e obstrui seu fluxo de trabalho.

A partir de conversas com clientes, ouvimos os mesmos pontos problemáticos repetidamente. Os pesquisadores querem verificações mais rápidas de produtos de PCR, telas de alto rendimento que não param e bandas limpas que podem ir direto para a ligadura ou recuperação do gel. O setor de compras quer consumíveis que durem e não exijam substituição constante. Na Longlight Technology, fizemos uma pergunta simples: e se a eletroforese de ácido nucleico pudesse ser concluída de forma confiável em 5 a 10 minutos sem sacrificar o desempenho a jusante?

❓ O que os laboratórios nos dizem?

Superaquecimento, resistência do buffer inconsistente entre a fundição e a execução e ansiedade sobre as etapas a jusante limitam a velocidade. As equipes hesitam em trocar os tampões porque se preocupam com a ligação, o rendimento da extração ou a estabilidade do RNA. Você não deveria ter que escolher entre velocidade e qualidade.

(Figure 1. Aplicação de tampão de execução super rápida em gel de agarose a 0,8%. Pista 1: D12000

escada (5 μL); Pista 2: 4 μL; Pista 3: 3 μL; Faixa 4: 2 μL; Pista 5: 1 μL)

(Figura 2. Aplicação de buffer de execução super rápida em

1% de gel de agarose. Pista 1: escada D5000 (5 μL); Pista 2: 4 μL; Pista 3: 3 μL; Faixa 4: 2 μL; Pista 5: 1 μL)

(Figura 3. Aplicação de buffer de execução super rápida em

2% de gel de agarose. Pista 1: escada D1000 (5 μL); Pista 2: 4 μL; Pista 3: 3 μL; Faixa 4: 2 μL; Pista 5: 1 μL.)

• O Super Fast Running Buffer é totalmente compatível com várias concentrações de géis de agarose (0,8%, 1%, 2%), conforme mostrado Figura 1–3. Independentemente da concentração do gel, as bandas de ácido nucleico mantêm excelente resolução e clareza, garantindo as necessidades experimentais de separação de moléculas de DNA de tamanhos diferentes.

A correção: buffer de execução super rápida explicado

Nosso 50x Buffer de execução super rápida é uma formulação de baixa força iônica construída especificamente para eletroforese de ácido nucleico de agarose. Menos carga iônica significa menos calor em um determinado campo. Combine-o com a concentração certa de agarose e você poderá operar com confiança em até 25 a 30 V/cm, comprimindo uma corrida que geralmente leva 30 minutos em apenas 5 a 10 minutos. No uso frente a frente, as equipes normalmente veem separações ~ 2,5 - 3x mais rápidas do que o padrão 1x TAE ou 1x TBE.

Como funciona

A menor força do íon reduz o aquecimento Joule e ajuda a manter as bandas afiadas em tensão mais alta. Essa estabilidade térmica preserva a resolução do DNA e do RNA, ao mesmo tempo em que permite a velocidade. Tão importante quanto, a química é amigável a jusante: não interfere na extração ou ligação do gel de DNA, então você pode passar diretamente para a clonagem, limpeza ou quant.

• Retorno rápido: 5 a 10 minutos a 25 a 30 V / cm

• Bandas afiadas: alta resolução mesmo sob altas intensidades de campo

• Compatibilidade a jusante: Sem impacto na recuperação ou ligadura do gel

• Maior recuperação: Freqüentemente excede o desempenho de recuperação TAE/TBE

• Capacidade de buffer reutilizável: Buffer forte para vários usos

• Configuração rápida

Dilua o tampão 1:50 para preparar uma solução de trabalho 1x (por exemplo, 20 mL de 50x em 980 mL de água destilada). Armazene o 1x em temperatura ambiente. Para melhor consistência, use o mesmo lote de 1x para fundir e executar o gel; A mistura de lotes diferentes pode alterar a resistência do tampão na interface do gel. Não dilua abaixo de 1x – isso convida a uma migração anormal.

Condições de operação

Execute a 25 – 30 V/cm de comprimento do gel e ajuste com base na geometria do tanque e no comportamento térmico. Como em qualquer execução de campo alto, confirme os limites da fonte de alimentação; Se a corrente ou voltage diminuir, verifique se o instrumento está limitando a corrente ou a potência. A coloração é flexível: adicione corante ao gel ou mancha após a corrida – ambos funcionam.

• Segurança e estabilidade

Corridas contínuas ou altas temperaturas ambientes podem aumentar a temperatura do buffer. Se necessário, resfrie a unidade ou coloque-a no gelo para proteger a resolução. Substitua o buffer periodicamente para manter a precisão. Armazene 50x estoque e 1x soluções de trabalho em temperatura ambiente; Sob as condições recomendadas, a estabilidade é de pelo menos 12 meses a partir do recebimento. Como sempre, use um jaleco e luvas descartáveis. Este produto destina-se ao uso em pesquisa por profissionais.

Ganhos no mundo real e como começar

Quando a velocidade é confiável, tudo a jusante melhora. Um gel de 5 a 10 minutos permite verificar a PCR, ajustar uma preparação de biblioteca ou validar uma ligadura sem atrapalhar o dia. Para grupos de alta taxa de transferência, géis mais rápidos desobstruem filas e aumentam a taxa de transferência. Isso significa mais dados antes do almoço – e menos reprises noturnas.

Na Longlight Technology, construímos esse buffer para ajudar as equipes a encurtar o ciclo entre a hipótese e o resultado. Em implantações piloto, os laboratórios relataram bandas mais limpas em campos mais altos, transferências mais suaves para ligadura e melhor rendimento de extração de gel em comparação com tampões legados. A reutilização e o formato concentrado de 50x também suportam o controle de custos: uma garrafa ajuda muito e a forte capacidade de buffer significa menos trocas no meio de uma execução.

Melhores práticas para eletroforese rápida de ácido nucleico

• Elenco e execução com o mesmo lote 1x para consistência.

• Comece em 25 V/cm e, em seguida, vá para 30 V/cm conforme sua configuração permitir.

• Observe a temperatura do buffer em sequências mais longas de corridas; Deixe esfriar conforme necessário.

• Mantenha a tensão abaixo de 200 V se você deixar cair um gel fundido TAE/TBE no tampão rápido; tensões muito altas podem distorcer os resultados nesse cenário.

• Onde brilha

Execuções de verificação curtas, verificações rápidas durante a clonagem, triagem de dezenas de amplificadores de PCR e aceleração dos fluxos de trabalho de RNA que normalmente rastejam em sistemas tradicionais. Se sua equipe gasta mais tempo esperando géis do que agindo sobre os resultados, o ganho é imediato.

Pensamentos Fina

Pronto para reduzir o tempo de eletroforese de ácido nucleico para 10 minutos - sem perder clareza ou recuperação? Fale com a Longlight Technology hoje para solicitar uma amostra, obter um modelo de SOP ou revisar a compatibilidade de sua caixa de gel. Vamos transformar as corridas de gel de gargalos em um ponto de verificação rápido e manter seus experimentos em andamento.